CELL growth and viability analysis in poli membranes (L-lactic acid-CO-glycolic acid): an in vitro study / Análise do crescimento e viabilidade celular em membranas de poli (L-ácido láctico-CO-ácido glicólico): um estudo in vitro

ABSTRACT Objective: Performing an in vitro evaluation of the biological effects on cell growth and viability of fibroblasts in PLGA membranes with and without simvastatin. Methods: Two groups of resorbable synthetic polymeric membranes were used: PLGA, with and without simvastatin, cut into a suitable format to fit to 24 thermometric wells. Fibroblasts were grown on resorbable membranes and evaluated for proliferation and viability at 24, 48 and 72 hours after the beginning of cultivation, being the tests performed in triplicate. For the cell growth analysis, the Trypan blue exclusion method was applied, while cell viability was observed by the MTT test. The results were statistically analyzed applying the Two-Way ANOVA, followed by the Bonferroni test, with 95% confidence interval and P value smaller than 0.05 was accepted as statistically significant. Results: Statistical difference (p <0.01) was seen between the control group (2.16x104 ± 0.51 cells) and the PLGA group with simvastatin (1.58x104 ± 0.36 cells) in the 48-hour period. After 72 hours, statistical differences (p <0.001) were observed between the PLGA group with simvastatin (1.66x104 ± 0.49 cells) and the PLGA group without simvastatin (2.25x104 ± 0.2 cells) when compared to the control group (2.81x104 ± 0.33 cells) for cell proliferation. Statistical differences (p <0.05) were observed between the control group (0.27 ± 0.05) and the PLGA group with simvastatin (0.21 ± 0.03). Likewise, a statistical difference (p <0.001) was seen between the PLGA group without simvastatin (0.19 ± 0.02) and the control group after 24 hours. In the 48 - 72-hour period, statistical differences (p <0.001) were observed between the control group (0.36 ± 0.09 and 0.55 ± 0.05, after 48 and 72 hours respectively) and the PLGA group without simvastatin (0.26 ± 0.05 and 0.34 ± 0.07, after 48 and 72 hours respectively), as well as in the PLGA group with simvastatin (0.27 ± 0.04 and 0.31 ± 0, 04, after 48 and 72 hours respectively) for the cell viability test. Conclusion: The association of simvastatin to PLGA membranes had an inhibitory effect on fibroblast proliferation, as well as induced a reduction in cell viability. Thus, the use of PLGA along with simvastatin may assist in guided bone regeneration.

RESUMO Objetivo: Esse trabalho avaliou, in vitro, os efeitos biológicos no crescimento e viabilidade celular de fibroblastos em membranas de PLGA com e sem sinvastatina. Materiais e métodos: Foram utilizados dois grupos de membranas reabsorvíveis de polímeros sintéticos: PLGA com sinvastantina e sem sinvastantina, recortadas em formato apropriado para adaptar nas placas de 24 wells termométricas. Os fibroblastos foram cultivados em membranas reabsorvíveis, sendo avaliadas em relação à proliferação e viabilidade em 24, 48 e 72 horas após o início do cultivo, os testes foram realizados em triplicata. Para a análise do crescimento celular foi utilizado o método de exclusão vital azul de Tripan, enquanto a viabilidade celular foi observada pelo teste MTT. Os resultados obtidos foram estatisticamente analisados utilizando Two-Way ANOVA, seguido pelo teste de Bonferroni, com intervalo de confiança de 95% e um valor de P inferior a 0,05 foi aceito como estatisticamente significativo. Resultados: Foi observado diferença estatística (p<0,01) entre o grupo controle (2,16x104 ± 0,51 células) e o grupo PLGA com sinvastatina (1,58x104 ± 0,36 células) no período de 48 horas. Após 72 horas, diferenças estatísticas (p<0,001) foram observadas entre o grupo PLGA com sinvastatina (1,66x104 ± 0,49 células) e o grupo PLGA sem sinvastatina (2,25x104 ± 0,2 células) em comparação ao grupo controle (2,81x104 ± 0,33 células) quanto a proliferação celular. Diferenças estatísticas (p<0,05) foram observadas entre o grupo controle (0,27 ± 0,05) e o grupo PLGA com sinvastatina (0,21 ± 0,03), da mesma forma que, diferença estatística (p<0,001) foram observadas entre o grupo PLGA sem sinvastatina (0,19 ± 0,02) e grupo controle após 24 horas. No período de 48 horas e 72 horas diferenças estatísticas (p<0,001) foram observadas entre o grupo controle (0,36 ± 0,09 e 0,55 ± 0,05, após 48 e 72 horas respectivamente) e o grupo PLGA sem sinvastatina (0,26 ± 0,05 e 0,34 ± 0,07, após 48 e 72 horas respectivamente), assim como, o grupo PLGA com sinvastatina (0,27 ± 0,04 e 0,31 ± 0,04, após 48 e 72 horas respectivamente) quanto ao teste de viabilidade celular. Conclusão: A associação de sinvastatina às membranas de PLGA apresentou um efeito inibitório na proliferação de fibroblastos, bem como induziu uma redução da viabilidade celular destes, deste modo, sugere-se a utilização de PLGA associado à sinvastatina como uma ferramenta para auxiliar na regeneração óssea guiada.

Análise microbiológica in vitro do selamento bacteriano de implante osseointegrável e pilar protético intermediário / In vitro microbiological analysis of the bacterial sealing between dental implant and a prosthetic abutment

Objetivo: avaliar pela análise microbiológica in vitro a capacidade de selamento bacteriano de dois modelos de implante conexão cone-morse e hexágono externo. Material e métodos: foram utilizados 28 implantes osseointegráveis (Colosso Emfils ­ Itu/SP, Brasil) divididos em dois grupos (14 implantes cada), nos quais os componentes protéticos foram parafusados com um torque de 20 Ncm, em um ambiente controlado e após contaminação propositada da parte interna dos implantes por Escherichia coli. As colônias bacterianas foram transportadas por meio de hastes confeccionadas por fios ortodônticos, previamente esterilizadas, e então fixados seus respectivos pilares protéticos. Em seguida, um microbrush umedecido em solução salina a 0,9% estéril foi levemente friccionado na interface da superfície externa implante/conector protético. Cada conjunto implante/componente protético foi imerso em um tubo de ensaio contendo 5 ml de caldo BHI, permanecendo imerso no meio de cultura. As amostras foram monitoradas em relação ao crescimento bacteriano. Resultados: após 14 dias, verificou-se que não houve contaminação em nenhum dos tipos de conexões. Conclusão: a utilização desses implantes já evitaria a contaminação bacteriana nos primeiros dias após a carga imediata, determinando assim o aumento do índice de sucesso desse procedimento.

Objective: to evaluate by in vitro microbiological analysis the bacterial sealing ability of two implant models (Morse cone and external hexagon connections). Material and methods: Twentyeight dental implants (Colosso Emfi ls ­ Itu/SP, Brazil) were divided into two groups (14 implants each) and the prosthetic components screwed with a 20 Ncm torque in a controlled environment and after deliberate contamination of the internal part of the implants by Escherichia coli. The bacterium strain was transported by orthodontic wire loops previously sterilized and then the prosthetic abutments were fastened. After, a microbrush moistened with a 0.9% saline sterile solution was lightly rubbed into the external implant/ prosthetic abutment surface. Each implant/prosthetic assembly was immersed in a test tube containing 5 ml of BHI broth remaining immersed in the culture medium. Samples were monitored for bacterial growth. Results: after 14 days, no contamination was observed in any of the implant connections. Conclusion: the use of these implants would already prevent bacterial contamination in the first days after immediate loading, thus increasing the success rate of this procedure.